前面说到本科+研究僧6年就让我明白一个道理：我是个大傻逼。知道这事儿后，俺渐渐从震惊中淡定下来，接下来就要努力使自己不傻逼。于是作出决定（其实是无路可走，-！-）留校暂且当个研究助理，利用那些高科技的东东提高自己。紧接着，和同门师弟欧阳大熊同学一起勾兑了一个小规模研究课题，目的不在于非要整个啥璀璨的结果，而是要充分利用那套牛逼闪闪的DNA实验设备。两个不折腾会死星人就这样开始了为期一个星期的瞎折腾实验~
这个课题的目标是通过一些入门级的DNA技术来分析三个污水处理厂五套处理系统活性污泥中的生态微宇宙，看看不同污水厂污泥微生态系统到底有啥不同。主要用到的技术有：DNA提取与纯化技术、DNA的聚合酶链锁反应扩增技术（PCR）、温度梯度凝胶电泳技术（TGGE）（有兴趣的看管可以去wiki了解一下它们的原理）。其实在之前我对这些只有概念上的认识，而大熊则花了本年的时间去与学校官僚周旋，靠借，靠赊，靠哄，建立了这一套设备（原价贵得一塌糊涂），并历尽艰辛的摸通了相关的实验方法；于是这一次，他是俺的老师。
可是分子生物学实验尺度很小，精度要求很高，环节众多，陷阱丛生，很多情况下要到最后才知道成功与否。果不其然，俺们遇到了意想不到的折磨。一开始是用经典化学法提取的DNA没有荧光反应，要不就是纯度很低，15个样本一共做了三批次的平行实验，不停的离心、萃取、制胶、点样、跑胶、紫外荧光显像，这个步骤花了两天，一大早做到深夜一两点。由于第一步提取出来的DNA量很少，肉眼几乎无法辨识，所以需要对载有标志物种差异基因的DNA片段进行复制扩增。又是反复的复制、制胶、点样、跑胶、紫外荧光显像；于是又花了两天。第三步就是把不同物种混在一砣的物种标志性DNA片段分开，制成图谱，这样就可以对比各个样品间的物种差异了。实验药剂的用量一直是个位数微升级的，而一些实验耗材都很贵，一种用来支撑尿素-丙烯酰胺凝胶的塑料膜一张就是五十个大洋，这一次俺们就毁掉了500个大洋！于是又是反复的失败，反复的尝试，制胶、点样、跑胶、可见光成像，又花了两天时间，通宵了一个晚上。凭着毅力、花了一个星期，最终制得了三张微生态系统图谱，算是实验完毕~ 啊~，俺们做的不是实验，是寂寞~
上图是其中一个图谱。可以粗略的认为一个条带对应了一种（或一坨亲缘关系很近的）微生物，不同微生物对应不同位置的条带。俺们可以看到左边两条图谱很相似，这是同一污水厂不同工程期的泥样，但是用了同样的污水和工艺，它们的微生物物种构成及其相似。第三条是同一家厂的另外一期工程的泥样，因为用的污水处理工艺有些改动，所以它的物种构成明显与前两条不同。后面两条分别是两家不同厂的泥样图谱，由于两家厂虽然工艺一样但分属不同的城区，污水水质不同，导致了物种构成的差异。
接下来呢？把不同的条带切下来，进一步分离提纯，就可以做基因鉴定了。俺们实验室可没有这些牛逼设备。可以交给专业公司做鉴定，反馈一坨以碱基对ATCG表达的遗传密码，然后拿去美帝国主义一个物种数据库进行比对解码，最后就能确定到底是什么物种啦！牛逼！牛逼！当然，这一套实验技术还有很多不完善的地方，很多不明白的地方，不够理想，不够严谨，需要进一步总结，探索，折腾，争取下一次改进。说实在的，俺在过程中感受到了科学研究的乐趣，变态吧~
之后如果有精力会再尝试更多的分子生物学技术，比如说DNA序列突变实验、DNA温度变性横向实验、荧光染色、RNA逆转录鉴定啥的~牛逼了！牛逼了！
PS：由于涉及研究成果的保密，文中样品细节均不便透露~
PS2：有机会俺要用这一套技术对自己做一下“物种鉴定”，哈哈哈哈哈~
PS3：本文题图来自维基百科，实验图像版权归本人所有。
PS4：这个星期过的是昼夜不分的日子，让家里人担心啦~我还活着，一切安好，谢谢关心！
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原来蜥蜴童鞋是学这个的……
本业是环境工程，但是各种门类都要做，化学地，物理地，生物地，外星地~
高深啊高深，膜拜啊膜拜……
btw, 此文匹配的google 广告出现了亲子鉴定……再次Orz
隔行如隔山啦，您的专业我也觉得很高深，嘿嘿
and您居然还看广告~
围观。
哦 不要打击我 我的今天刚被封
为什么不读博士？
要读啊~ 明年
我我我 我高中时期最讨厌的就是生物了 哎
俺怎么觉得这些条带都差不多啊，呵呵
眼神儿不好~
纯粹围观膜拜…╮(╯▽╰)╭
专业技术文，看不懂，纯围观，我是打酱油的。
第一句很能引发共鸣
换句话说是拥有了自知之明的力量，嘿嘿
要读博士了。。。。。囧。。。。。。
读博士就囧啦？呵呵
这东西，固定资产投入大，但流动资金却不大。
能不能有这些研究制造细菌把垃圾吃掉？？
呃~ 用细菌吃垃圾的技术早开始用了
挺高深的啊
换主题好啊！哈哈
well…熟悉的凝胶电泳和不熟悉的PCR….
化院小本的师弟飘一下…
化院的！赞！PCR是生物方面的
用银显影的?银显影和EB显影有什么区别么….
啊，不懂eb显影
Thank you! You often write very interesting articles. You improved my mood.
为啥胶背景是黄色的啊？
因为在凝胶用硝酸银显影的时候背景也会有一定程度的显影~
银染，奢侈啊
是用的硝酸银，不会很奢侈
借用你的一句名言：高科技啊~~~~
顶csi
来我们实验室做这个吧，我们实验室天天做…………不过有的人总p不出来，你们太幸运鸟！
俺们也是试验了好久才p出来滴~ 你丫继续盗用jkr的链接，嘿嘿
果然看不懂，嘻嘻
又是围观
Pingback: 火星蜥蜴馆 » Tony’s lomo #16.请勿沉迷爷
蜥蜴大哥，我们干的是一行的呀！冠冕堂皇就称作生命科学研究者了。